معرفی کیت تشخیص اندوتوکسین PyroGene rFC لونزا
کیت PyroGene rFC لونزا با نام رسمی PyroGene® Recombinant Factor C Endpoint Fluorescent Assay یک کیت آزمایشگاهی برای شناسایی و اندازه گیری کمی اندوتوکسین های باکتریایی است. این محصول توسط شرکت Lonza تولید می شود و با استفاده از پروتئین نوترکیب Factor C و روش فلورسانس، غلظت اندوتوکسین را در نمونه های مختلف اندازه گیری می کند.
این کیت با کد رسمی 50-658U دارای ظرفیت حداکثر ۱۹۲ تست است و محدوده اندازه گیری آن از 0.005 تا 5 EU/mL می باشد. کد 658u-50 که گاهی با ترتیب معکوس نوشته می شود، کد رسمی کاتالوگ سازنده نیست و برای سفارش باید از کد 50-658U استفاده شود.
برخلاف روش های سنتی LAL که از لیزات سلول های خونی خرچنگ نعل اسبی استفاده می کنند، در این کیت از فاکتور C تولید شده به روش نوترکیب استفاده می شود. این ویژگی علاوه بر کاهش وابستگی به منابع جانوری، باعث اختصاصیت بیشتر آزمون نسبت به اندوتوکسین های باکتریایی می شود.
مشخصات فنی و محتویات کیت PyroGene 50-658U
این محصول یک کیت سنجش اندوتوکسین مبتنی بر فلورسانس نقطه پایانی (Endpoint Fluorescent Assay) است که برای اجرای آزمون در میکروپلیت های ۹۶ خانه ای طراحی شده است.
- روش سنجش: Recombinant Factor C (rFC)
- نوع اندازه گیری: کمی، بر اساس شدت فلورسانس
- ظرفیت: حداکثر ۱۹۲ تست
- محدوده اندازه گیری: 0.005 تا 5 EU/mL
- طول موج تحریک: 380 نانومتر
- طول موج نشر: 440 نانومتر
- دمای انکوباسیون: ۳۷ درجه سانتی گراد
- زمان انکوباسیون: حدود ۶۰ دقیقه
محتویات بسته شامل دو ویال محلول آنزیم rFC با ظرفیت ۹۶ تست برای هر ویال، دو ویال ۶ میلی لیتری سوبسترای فلوروژنیک، دو ویال ۵ میلی لیتری بافر آزمون، دو ویال اندوتوکسین استاندارد و دو ویال ۳۰ میلی لیتری آب مخصوص معرف LAL است.
ظرفیت ۱۹۲ تست نشان دهنده تعداد واکنش های قابل انجام با معرف است. تعداد نمونه های واقعی که می توان بررسی کرد، با توجه به تعداد استانداردها، کنترل ها و تکرارهای آزمایش ممکن است کمتر باشد.
نحوه عملکرد روش فلورسانس rFC
اساس عملکرد کیت اندوتوکسین PyroGene بر واکنش اختصاصی اندوتوکسین با پروتئین نوترکیب Factor C است. در حضور اندوتوکسین، این پروتئین فعال می شود و سوبسترای فلوروژنیک موجود در مخلوط واکنش را تجزیه می کند.
در نتیجه این واکنش، ترکیب فلورسنت ایجاد می شود که شدت سیگنال آن با میزان اندوتوکسین موجود در نمونه ارتباط دارد. میزان فلورسانس با دستگاه میکروپلیت ریدر فلورسانس اندازه گیری می شود.
در روش استاندارد، سیگنال فلورسانس در ابتدای آزمون و پس از انکوباسیون خوانده می شود. سپس تغییرات فلورسانس با استفاده از منحنی استاندارد اندوتوکسین تحلیل شده و غلظت نمونه بر حسب EU/mL محاسبه می شود.
این روش برخلاف آزمون ژل کلات که معمولا نتیجه مثبت یا منفی ارائه می دهد، امکان تعیین کمی غلظت اندوتوکسین را فراهم می کند.
کاربردهای کیت اندوتوکسین لونزا در صنایع دارویی
کیت PyroGene rFC برای آزمایشگاه هایی طراحی شده است که به اندازه گیری کمی اندوتوکسین در فرایند تولید، تحقیق و کنترل کیفیت نیاز دارند.
- کنترل کیفیت دارویی: بررسی میزان اندوتوکسین در مواد اولیه و فرآورده های دارویی
- آزمایش آب دارویی: ارزیابی آلودگی اندوتوکسینی در نمونه های آب مورد استفاده در تولید دارو
- محصولات بیولوژیک: سنجش اندوتوکسین در نمونه های سازگار با روش rFC
- کنترل حین تولید: پایش میزان اندوتوکسین در مراحل مختلف فرایندهای تولید
- محصولات نهایی: انجام آزمون اندوتوکسین برای کنترل کیفیت و بررسی انطباق با حدود مجاز
- تحقیقات آزمایشگاهی: اندازه گیری اندوتوکسین در نمونه های تحقیقاتی و مطالعات مرتبط با آلودگی باکتریایی
استفاده از این کیت برای نمونه های دارویی و بیولوژیک باید پس از بررسی تداخل احتمالی نمونه و تایید مناسب بودن روش انجام شود. بعضی ترکیبات موجود در نمونه، به ویژه مواد دارای فلورسانس ذاتی، ممکن است در اندازه گیری اختلال ایجاد کنند.
مزایای کیت PyroGene rFC نسبت به روش های LAL
یکی از مزایای اصلی کیت rFC لونزا اختصاصیت بالای آن در شناسایی اندوتوکسین است. روش های LAL در برخی شرایط ممکن است در اثر حضور بتا گلوکان ها واکنش نشان دهند، اما فناوری rFC با حذف مسیر فعال سازی وابسته به گلوکان، احتمال ایجاد پاسخ مثبت کاذب ناشی از این ترکیبات را کاهش می دهد.
استفاده از فاکتور C نوترکیب همچنین وابستگی آزمون به برداشت لیزات جانوری را از بین می برد و می تواند به یکنواختی عملکرد معرف در بچ های مختلف کمک کند.
از دیگر مزایای این کیت می توان به محدوده اندازه گیری کمی 0.005 تا 5 EU/mL، قابلیت اجرا در میکروپلیت های ۹۶ خانه ای و امکان استفاده در فرایندهای خودکار آزمایشگاهی اشاره کرد.
البته این روش فقط اندوتوکسین های باکتریایی را شناسایی می کند و برای تشخیص تمام انواع مواد تب زا یا پیروژن ها طراحی نشده است.
شرایط نگهداری و تجهیزات مورد نیاز
کیت PyroGene rFC با کد 50-658U باید در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی گراد نگهداری شود. حفظ زنجیره سرد در زمان حمل و نقل اهمیت دارد، زیرا قرار گرفتن معرف ها در دمای نامناسب ممکن است باعث کاهش فعالیت آنزیمی و اختلال در نتایج آزمون شود.
پس از باز شدن ویال ها، اجزای استفاده نشده باید مطابق دستورالعمل سازنده در شرایط یخچالی نگهداری شوند. شرایط مصرف و ماندگاری معرف ها باید با اطلاعات همان بچ محصول تطبیق داده شود.
برای اجرای آزمون به میکروپلیت ریدر فلورسانس با قابلیت اندازه گیری در طول موج های 380 و 440 نانومتر، امکان انکوباسیون در دمای مناسب، میکروپلیت سازگار با آزمون اندوتوکسین و تجهیزات نمونه برداری فاقد اندوتوکسین نیاز است.
نکات مهم هنگام خرید کیت Lonza PyroGene rFC
پیش از خرید کیت PyroGene با کد 50-658U، باید سازگاری دستگاه فلورسانس آزمایشگاه با شرایط آزمون، تعداد تست مورد نیاز و محدوده اندازه گیری بررسی شود.
همچنین توجه به تاریخ انقضا، شرایط حمل یخچالی، شماره بچ و گواهی آنالیز (CoA) محصول ضروری است. وجود تجهیزات مناسب و امکان اجرای کنترل های مثبت و منفی نیز باید پیش از سفارش ارزیابی شود.
برای استفاده در کنترل کیفیت رسمی محصولات دارویی، لازم است روش مطابق الزامات فارماکوپه ای و مقررات قابل اعمال اعتبارسنجی و مناسب بودن آن برای نمونه مورد نظر تایید شود. حساسیت اسمی کیت به تنهایی تضمین نمی کند که حد تشخیص مورد نیاز در همه ماتریس های نمونه به دست آید.
Lonza +2
دیدگاه‌ها
هنوز دیدگاهی ثبت نشده. اولین نفری باشید که نظر می‌دهد.
دیدگاه خود را بنویسید
نشانی ایمیل و موبایل شما منتشر نخواهد شد.