معرفی معرف مارفی FDAA سیگما D7906
معرف مارفی (Marfey's Reagent) با نام اختصاری FDAA یک معرف مشتق ساز کایرال است که برای بررسی و تفکیک ایزومرهای فضایی اسیدهای آمینه در آزمایشگاه های شیمی تجزیه، بیوشیمی و زیست شناسی مولکولی استفاده می شود. محصول شرکت Sigma-Aldrich با کد D7906 دارای خلوص حداقل 98 درصد براساس آزمون کروماتوگرافی لایه نازک (TLC) است و در بسته بندی 100 میلی گرمی با شناسه D7906-100MG عرضه می شود.
نام شیمیایی این محصول Nα-(2,4-Dinitro-5-fluorophenyl)-L-alaninamide است. معرف مارفی با فرمول مولکولی C9H9FN4O5، جرم مولکولی 272.19 گرم بر مول و شماره CAS برابر 95713-52-3 شناخته می شود. این ماده به شکل پودر عرضه می شود و در استون با غلظت 10 میلی گرم بر میلی لیتر قابلیت انحلال دارد.
ویژگی اصلی معرف مارفی، توانایی واکنش با گروه های آمینی و تشکیل مشتقات دی استریومری از انانتیومرهای اسیدهای آمینه است. این مشتقات را می توان در شرایط مناسب به کمک روش های کروماتوگرافی مانند HPLC از یکدیگر جدا کرد. به همین دلیل FDAA یکی از معرف های شناخته شده برای تعیین پیکربندی فضایی و بررسی خلوص انانتیومری اسیدهای آمینه محسوب می شود.
ویژگی های شیمیایی و مشخصات کیفی معرف مارفی
معرف مارفی یک ترکیب آلی کایرال حاوی گروه های نیترو و فلوئور است. حضور بخش کایرال مشتق شده از L-آلانین در ساختار آن، اساس کاربرد این ماده در مشتق سازی انتخابی و ایجاد مشتقات دی استریومری قابل تفکیک است.
مهم ترین مشخصات کیفی و شیمیایی محصول سیگما D7906 عبارت اند از:
- نام اختصاری: FDAA
- خلوص محصول: حداقل 98 درصد براساس TLC
- شکل فیزیکی: پودر
- رنگ گزارش شده: زرد تا نارنجی با شدت رنگ متغیر
- حلالیت در استون: 10 میلی گرم بر میلی لیتر با تشکیل محلول شفاف
- شماره شناسایی MDL: MFCD00042049
- سطح کیفی سازنده: Quality Level 200
- نوع معرف: Chiral Derivatizing Agent
خلوص حداقل 98 درصد نشان دهنده مشخصه کیفی محصول براساس روش TLC است. این ویژگی برای استفاده در روش های مشتق سازی اهمیت دارد، زیرا ناخالصی های معرف ممکن است در برخی شرایط بر تشکیل محصولات واکنش یا الگوی پیک های کروماتوگرافی تاثیر بگذارند.
با این حال، خلوص شیمیایی معرف به تنهایی تضمین کننده دقت تعیین پیکربندی فضایی نیست. برای دستیابی به نتایج معتبر، شرایط واکنش، استانداردهای مقایسه ای و روش جداسازی نیز باید کنترل شوند.
کاربردهای معرف مارفی در آنالیز اسیدهای آمینه
مهم ترین کاربرد FDAA، مشتق سازی اسیدهای آمینه برای بررسی پیکربندی فضایی و تفکیک فرم های D و L است. این قابلیت در آزمایشگاه هایی که به تعیین ترکیب و ویژگی های فضایی اسیدهای آمینه نیاز دارند اهمیت دارد.
- تفکیک اسیدهای آمینه D و L: معرف مارفی با تشکیل مشتقات دی استریومری امکان جداسازی انانتیومرهای اسیدهای آمینه را در شرایط کروماتوگرافی مناسب فراهم می کند.
- بررسی خلوص انانتیومری: از FDAA برای مطالعه نسبت ایزومرهای فضایی و ارزیابی خلوص انانتیومری برخی اسیدهای آمینه استفاده می شود.
- شناسایی اسیدهای آمینه: مشتق سازی با معرف مارفی می تواند به شناسایی اسیدهای آمینه در روش های آنالیزی معتبر کمک کند.
- آنالیز پپتیدها: در برخی مطالعات، اسیدهای آمینه حاصل از هیدرولیز پپتیدها با FDAA مشتق سازی می شوند تا پیکربندی فضایی آنها بررسی شود.
- تحقیقات ترکیبات طبیعی: برای تعیین پیکربندی اسیدهای آمینه موجود در بعضی پپتیدها و ترکیبات زیستی طبیعی کاربرد دارد.
برای آنالیز کمی، علاوه بر مشتق سازی مناسب، استفاده از استانداردهای مرجع تحلیلی، منحنی کالیبراسیون و ارزیابی بازیابی و تکرارپذیری روش ضروری است. همچنین همه اسیدهای آمینه و ترکیبات آمینی لزوما تحت یک شرایط واکنش یا روش کروماتوگرافی رفتار یکسانی ندارند.
مکانیسم عملکرد معرف مارفی در مشتق سازی کایرال
معرف مارفی از طریق واکنش با گروه آمینی اسیدهای آمینه، مشتقات کایرال تولید می کند. در این فرایند، اتم فلوئور موجود در ساختار آروماتیک FDAA در واکنش جانشینی نوکلئوفیلی با گروه آمینی جایگزین می شود و یک مشتق پایدارتر برای بررسی کروماتوگرافی تشکیل می شود.
هنگامی که اسیدهای آمینه دارای پیکربندی D و L با معرف مارفی مشتق سازی می شوند، محصولات حاصل به دلیل حضور بخش کایرال معرف، رابطه دی استریومری پیدا می کنند. دی استریومرها برخلاف انانتیومرها می توانند خواص فیزیکوشیمیایی متفاوتی داشته باشند و در یک سامانه کروماتوگرافی غیر کایرال نیز قابل تفکیک باشند.
این ویژگی امکان بررسی پیکربندی اسیدهای آمینه را بدون نیاز الزامی به ستون کروماتوگرافی کایرال فراهم می کند. البته موفقیت در جداسازی به ساختار ترکیب، فاز متحرک، نوع ستون و شرایط روش بستگی دارد.
برای شناسایی قطعی فرم های D و L، زمان بازداری مشتقات نمونه باید با استانداردهای معتبر تحت شرایط یکسان مقایسه شود. ترتیب خروج پیک ها نباید بدون تایید تجربی به تمام اسیدهای آمینه تعمیم داده شود.
کاربرد معرف مارفی در HPLC و تحقیقات میکروبیولوژی
کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) یکی از مهم ترین روش های بررسی مشتقات تولید شده با معرف مارفی است. در این روش، اسیدهای آمینه ابتدا با FDAA واکنش داده و سپس محصولات حاصل به کمک سامانه کروماتوگرافی مناسب جداسازی می شوند.
وجود گروه های آروماتیک و نیترو در ساختار مشتقات می تواند امکان آشکارسازی آنها را با آشکارساز UV در شرایط مناسب فراهم کند. انتخاب طول موج، فاز متحرک و برنامه جداسازی باید مطابق روش تحلیلی معتبر انجام شود.
در تحقیقات میکروبیولوژی، معرف مارفی برای بررسی پیکربندی اسیدهای آمینه موجود در ترکیبات زیستی و بعضی اجزای دیواره سلولی باکتری ها کاربرد دارد. از جمله ترکیبات مورد بررسی می توان به D-آلانین، L-آلانین و ایزومرهای گلوتامات اشاره کرد.
همچنین در مطالعات پپتیدهای طبیعی و ترکیبات تولید شده توسط میکروارگانیسم ها، شناسایی پیکربندی اسیدهای آمینه می تواند به تعیین ویژگی های ساختاری ترکیب کمک کند. در این کاربردها ممکن است پیش از مشتق سازی، انجام مراحل آماده سازی نمونه یا هیدرولیز ضروری باشد.
استفاده از FDAA در روش های پیشرفته مانند LC-MS نیز در صورت وجود روش معتبر امکان پذیر است، اما مناسب بودن محصول برای هر سامانه باید براساس شرایط دستگاه و نوع آنالیت بررسی شود.
تفاوت معرف مارفی با نینهیدرین
معرف مارفی و نینهیدرین هر دو در آنالیز اسیدهای آمینه کاربرد دارند، اما هدف و مکانیسم عملکرد آنها متفاوت است. نینهیدرین عمدتا برای شناسایی و اندازه گیری ترکیبات آمینی از طریق واکنش رنگی استفاده می شود، در حالی که معرف مارفی به طور ویژه برای مشتق سازی کایرال و بررسی پیکربندی فضایی اسیدهای آمینه کاربرد دارد.
در آزمون نینهیدرین، تشکیل محصولات رنگی مبنای آشکارسازی بسیاری از اسیدهای آمینه است. در مقابل، FDAA با اسیدهای آمینه واکنش داده و مشتقات دی استریومری تشکیل می دهد که می توانند با روش HPLC جداسازی شوند.
بنابراین اگر هدف آزمایش صرفا شناسایی یا اندازه گیری کلی گروه های آمینی باشد، ممکن است روش نینهیدرین مناسب باشد. اما زمانی که تفکیک ایزومرهای D و L یا بررسی خلوص انانتیومری اهمیت دارد، مشتق سازی با معرف مارفی یکی از روش های قابل استفاده است.
این دو معرف جایگزین مستقیم یکدیگر نیستند و انتخاب آنها باید براساس هدف آزمایش و روش آنالیزی انجام شود.
شرایط نگهداری، ایمنی و نکات خرید معرف مارفی
معرف مارفی سیگما با کد D7906 باید در دمای 2 تا 8 درجه سانتی گراد نگهداری شود. ظرف محصول باید کاملا بسته باشد و از تماس غیر ضروری ماده با رطوبت، آلودگی و شرایط نامناسب نگهداری جلوگیری شود.
براساس برگه اطلاعات ایمنی محصول، این ماده می تواند باعث تحریک پوست، چشم و دستگاه تنفسی شود. مهم ترین هشدارهای خطر آن عبارت اند از:
- H315: باعث تحریک پوست می شود.
- H319: باعث تحریک جدی چشم می شود.
- H335: ممکن است باعث تحریک دستگاه تنفسی شود.
هنگام کار با FDAA باید از دستکش مناسب، عینک محافظ و تهویه کافی استفاده شود. از استنشاق گرد و غبار و تماس مستقیم با پوست و چشم جلوگیری شود. انتخاب تجهیزات حفاظت تنفسی باید متناسب با ارزیابی خطر محیط آزمایشگاه باشد.
برای خرید معرف مارفی سیگما، توجه به کد کاتالوگ، خلوص و مقدار بسته بندی اهمیت دارد. این محصول در بسته بندی های 25 و 100 میلی گرمی با شناسه های D7906-25MG و D7906-100MG عرضه می شود.
پیش از سفارش، بررسی شماره بچ، گواهی آنالیز (COA)، تاریخ انقضا یا تاریخ بازآزمایی در صورت اعلام سازنده و شرایط حمل و نگهداری توصیه می شود. همچنین باید اطمینان حاصل شود که روش آزمایشگاهی به FDAA نیاز دارد و این ماده با معرف های مشتق ساز کایرال دیگر اشتباه گرفته نشده است.
محصول D7906 یک معرف تحقیقاتی است و رفرنس استاندارد رسمی فارماکوپه ای محسوب نمی شود. برای استفاده در آزمون های کنترل کیفیت دارای الزامات خاص، تناسب مشخصات محصول با روش تحلیلی باید به صورت مستقل ارزیابی شود.
دیدگاه‌ها
هنوز دیدگاهی ثبت نشده. اولین نفری باشید که نظر می‌دهد.
دیدگاه خود را بنویسید
نشانی ایمیل و موبایل شما منتشر نخواهد شد.