معرفی سوبسترای کروموژنیک فاکتور Xa BIOPHEN CS-11(65)
سوبسترای کروموژنیک فاکتور Xa مدل BIOPHEN CS-11(65) با کد 229014 محصول شرکت HYPHEN BioMed فرانسه است که برای اندازه گیری فعالیت آنزیم فاکتور Xa به روش رنگ سنجی طراحی شده است. این محصول یک سوبسترای پپتیدی سنتزی با خلوص بالا است که در حضور فاکتور انعقادی Xa تجزیه شده و ترکیب رنگی قابل اندازه گیری آزاد می کند.
فاکتور Xa یکی از آنزیم های اصلی مسیر انعقاد خون است که در تبدیل پروترومبین به ترومبین نقش دارد. اندازه گیری فعالیت این آنزیم در مطالعات هموستاز، بررسی مهارکننده های انعقاد و تحقیقات مربوط به فعالیت ضد Xa اهمیت دارد.
BIOPHEN CS-11(65) یک معرف تحقیقاتی با وضعیت Research Use Only یا RUO است و برای آزمایشگاه های تحقیقاتی، مراکز پژوهشی و مطالعات بیوشیمیایی مرتبط با انعقاد خون عرضه می شود. این محصول برای تشخیص بیماری، درمان بیماران یا استفاده مستقیم در تصمیم گیری بالینی تایید نشده است.
محصول کد 229014 به صورت یک ویال حاوی 25 میلی گرم سوبسترای لیوفیلیزه عرضه می شود و خلوص ماده موثر آن بیش از 95 درصد است.
ساختار شیمیایی و مشخصات فنی BIOPHEN CS-11(65)
ماده موثر این محصول یک ترکیب پپتیدی سنتزی با توالی Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA است که به صورت نمک دی هیدروکلراید عرضه می شود. نام شیمیایی آن Benzyloxycarbonyl-D-arginyl-glycyl-L-arginine-p-nitroanilide dihydrochloride است.
فرمول شیمیایی فرم دی هیدروکلراید C28H41Cl2N11O7 و جرم مولکولی آن 714.7 گرم بر مول است. جرم مولکولی ساختار پایه بدون دو مولکول HCl برابر با 641.7 گرم بر مول است. شماره CAS ماده موثر 113711-77-6 است.
ویژگی های فنی مهم این محصول عبارت اند از:
- نوع ماده: سوبسترای کروموژنیک پپتیدی سنتزی.
- آنزیم هدف: فاکتور انعقادی Xa یا Factor Xa.
- توالی پپتیدی: Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA·2HCl.
- خلوص ماده موثر: بیشتر از 95 درصد.
- شکل فیزیکی: پودر لیوفیلیزه تثبیت شده.
- مقدار بسته بندی: 25 میلی گرم در یک ویال.
- حلال مناسب برای بازسازی: آب مقطر.
- حلالیت در آب: حداقل 5 میلی گرم بر میلی لیتر.
- طول موج سنجش محصول رنگی واکنش: 405 نانومتر.
- جذب نوری pNA آزاد اولیه در محلول 2.5 میلی گرم بر میلی لیتر: حداکثر 0.30 در طول موج 405 نانومتر.
این محصول در حضور مانیتول به عنوان ماده کمکی حجم دهنده لیوفیلیزه می شود. مقدار واقعی ماده موثر و نتیجه آزمون خلوص هر بچ باید با گواهی آنالیز همان سری ساخت بررسی شود.
مکانیسم عملکرد سوبسترای کروموژنیک فاکتور Xa
عملکرد BIOPHEN CS-11(65) بر پایه هیدرولیز آنزیمی سوبسترای پپتیدی توسط فاکتور Xa است. در این واکنش، آنزیم فاکتور Xa پیوند مشخصی از سوبسترا را شکسته و ترکیب پارا نیتروآنیلین (pNA) را آزاد می کند.
پارا نیتروآنیلین آزاد شده رنگ زرد ایجاد می کند و جذب نوری آن در طول موج 405 نانومتر با استفاده از اسپکتروفتومتر یا دستگاه میکروپلیت ریدر مناسب قابل اندازه گیری است.
در شرایط یکسان آزمایش، افزایش فعالیت فاکتور Xa باعث افزایش سرعت آزادسازی pNA و افزایش جذب نوری می شود. بنابراین می توان از سرعت تغییر جذب نوری برای بررسی فعالیت آنزیم استفاده کرد.
در آزمایش هایی که فعالیت مهارکننده های فاکتور Xa بررسی می شود، کاهش فعالیت آنزیم باعث کاهش سرعت تولید ترکیب رنگی خواهد شد. این ویژگی در طراحی آزمون های تحقیقاتی مرتبط با هپارین و سایر مهارکننده های فاکتور Xa کاربرد دارد.
سوبسترای CS-11(65) کاملا اختصاصی فاکتور Xa نیست و ممکن است با برخی پروتئازهای دیگر مانند کالیکرئین، ترومبین، پلاسمین و پروتئین C فعال نیز واکنش نشان دهد. بر اساس داده های سازنده، واکنش نسبی آن با فاکتور Xa بیشتر از این آنزیم ها است، اما اختصاصیت نهایی آزمون به شرایط آزمایش بستگی دارد.
کاربردهای آزمایشگاهی و تحقیقاتی BIOPHEN CS-11(65)
سوبسترای کروموژنیک فاکتور Xa در آزمایشگاه های انعقاد خون و مراکز تحقیقات زیستی برای بررسی فعالیت آنزیم فاکتور Xa و تاثیر ترکیبات مختلف بر عملکرد آن استفاده می شود.
- سنجش فعالیت فاکتور Xa: اندازه گیری فعالیت آنزیمی فاکتور Xa در نمونه ها و محلول های تحقیقاتی.
- مطالعات هموستاز: بررسی عملکرد فاکتور Xa در مسیرهای انعقاد خون.
- آزمون های ضد Xa هپارین: استفاده به عنوان سوبسترای رنگ زا در روش های معتبر سنجش فعالیت مهاری هپارین بر فاکتور Xa.
- تحقیقات داروهای ضد انعقاد: بررسی اثر مهارکننده های مستقیم و غیر مستقیم فاکتور Xa.
- مطالعات آنتی ترومبین: بررسی مهار فاکتور Xa در حضور آنتی ترومبین در سیستم های آزمایشگاهی مناسب.
- مطالعات سینتیک آنزیمی: بررسی سرعت واکنش، فعالیت کاتالیتیکی و اثر غلظت سوبسترا بر عملکرد فاکتور Xa.
این محصول از نظر ساختار شیمیایی با سوبسترای شناخته شده Chromogenix S-2765 یکسان است و از نظر کاربرد می تواند به عنوان جایگزین قابل بررسی برای آن مطرح شود. با این حال، جایگزینی معرف در یک روش آزمایشگاهی باید با بررسی عملکرد و اعتبارسنجی روش انجام شود.
نحوه آماده سازی و شرایط نگهداری سوبسترای فاکتور Xa
سوبسترای BIOPHEN CS-11(65) به صورت لیوفیلیزه عرضه می شود و برای استفاده باید با حجم مناسبی آب مقطر بازسازی شود. مقدار آب مورد نیاز به غلظت نهایی سوبسترا و پروتکل آزمایش بستگی دارد.
برای مثال، افزودن 10 میلی لیتر آب مقطر به 25 میلی گرم سوبسترا، محلولی با غلظت اسمی 2.5 میلی گرم بر میلی لیتر ایجاد می کند. همچنین افزودن 20 میلی لیتر آب مقطر، محلولی با غلظت اسمی 1.25 میلی گرم بر میلی لیتر فراهم می کند.
پس از افزودن آب، محلول باید به خوبی مخلوط شود تا سوبسترا کاملا حل شود. طبق دستورالعمل سازنده، محلول بازسازی شده باید حدود 30 دقیقه در دمای محیط پایدار شود و سپس مورد استفاده قرار گیرد.
شرایط نگهداری و پایداری محصول عبارت اند از:
- ویال باز نشده: نگهداری در دمای 2 تا 8 درجه سانتی گراد تا تاریخ انقضای درج شده روی بسته بندی.
- محلول بازسازی شده در دمای 18 تا 25 درجه سانتی گراد: پایداری تا 7 روز.
- محلول بازسازی شده در دمای 2 تا 8 درجه سانتی گراد: پایداری تا 3 ماه.
- انجماد محلول بازسازی شده: توصیه نمی شود و باید از آن خودداری شود.
برای حفظ پایداری سوبسترا، باید از آلودگی محلول جلوگیری شود و ظروف مورد استفاده تمیز باشند. شرایط واقعی پایداری محلول در روش های اختصاصی آزمایشگاهی باید بررسی شود.
نکات مهم هنگام خرید سوبسترای BIOPHEN CS-11(65)
هنگام خرید سوبسترای کروموژنیک فاکتور Xa شرکت HYPHEN BioMed، بررسی کد محصول، مقدار ماده موثر، خلوص، نوع بسته بندی و سازگاری با روش آزمایش ضروری است.
کد 229014 مربوط به بسته بندی تک ویالی 25 میلی گرمی است. همین سوبسترا با کد 229014C نیز در بسته بندی 12 ویال 25 میلی گرمی عرضه می شود. این کد نشان دهنده بسته بندی متفاوت همان محصول است و نباید با کد معادل یا جایگزین رسمی اشتباه گرفته شود.
همچنین باید توجه داشت که BIOPHEN CS-11(65) با BIOPHEN CS-11(32) کد 229011 تفاوت دارد. هر دو برای سنجش فعالیت فاکتور Xa طراحی شده اند، اما ویژگی های سینتیکی و ترکیب پپتیدی آنها یکسان نیست.
برای انجام آزمایش، وجود دستگاه مناسب برای اندازه گیری جذب نوری در طول موج 405 نانومتر، بافر سازگار و تجهیزات دقیق اندازه گیری حجم اهمیت دارد.
پیش از سفارش، بررسی گواهی آنالیز (COA)، تاریخ انقضا، خلوص، شرایط حمل و نقل و نیازهای اختصاصی پروتکل توصیه می شود. این محصول یک سوبسترای آنزیمی تحقیقاتی است و نباید با فاکتور Xa خالص شده، کیت کامل سنجش Anti-Xa یا رفرنس استاندارد دارویی اشتباه گرفته شود.
دیدگاه‌ها
هنوز دیدگاهی ثبت نشده. اولین نفری باشید که نظر می‌دهد.
دیدگاه خود را بنویسید
نشانی ایمیل و موبایل شما منتشر نخواهد شد.