معرفی سوبسترای کروموژنیک ترومبین BIOPHEN CS-01(38)
سوبسترای کروموژنیک ترومبین BIOPHEN CS-01(38) با کد 229001 محصول شرکت HYPHEN BioMed فرانسه است که برای اندازه گیری فعالیت آنزیم ترومبین (Thrombin) یا فاکتور انعقادی IIa به روش رنگ سنجی طراحی شده است. این محصول یک سوبسترای پپتیدی سنتزی است که در حضور ترومبین تجزیه شده و یک ترکیب رنگی قابل اندازه گیری آزاد می کند.
این معرف در آزمایشگاه های تخصصی انعقاد خون، مراکز تحقیقاتی هموستاز و مطالعات بیوشیمیایی برای بررسی فعالیت آنزیمی ترومبین و واکنش های مرتبط با انعقاد کاربرد دارد. محصول با کد 229001 به صورت یک ویال حاوی 25 میلی گرم سوبسترای لیوفیلیزه عرضه می شود و دارای خلوص بیش از 95 درصد است.
BIOPHEN CS-01(38) یک معرف آزمایشگاهی با وضعیت Research Use Only یا RUO است و برای استفاده مستقیم در تشخیص بیماری یا تصمیم گیری درمانی تایید نشده است. این محصول یک سوبسترای آنزیمی است و به تنهایی کیت کامل سنجش انعقادی محسوب نمی شود.
ساختار شیمیایی و ویژگی های سوبسترای ترومبین
ماده موثر این محصول یک ترکیب پپتیدی سنتزی با توالی H-D-Phe-Pip-Arg-pNA است که به شکل نمک دی هیدروکلراید عرضه می شود. این ترکیب با نام H-D-Phenylalanyl-L-pipecolyl-L-arginine-p-nitroanilide dihydrochloride نیز شناخته می شود.
فرمول شیمیایی فرم دی هیدروکلراید این ماده C27H38Cl2N8O5 و جرم مولکولی آن حدود 625.6 گرم بر مول است. جرم مولکولی ساختار پایه بدون دو مولکول HCl برابر با 552.6 گرم بر مول است. شماره CAS مربوط به فرم دی هیدروکلراید ماده موثر 62354-65-8 است.
بر اساس اطلاعات فنی محصول، ویژگی های مهم آن عبارت اند از:
- نوع ماده: سوبسترای پپتیدی کروموژنیک سنتزی.
- آنزیم هدف: ترومبین یا فاکتور انعقادی IIa.
- فرم شیمیایی: H-D-Phe-Pip-Arg-pNA·2HCl.
- خلوص سوبسترا: بیشتر از 95 درصد.
- شکل فیزیکی: پودر لیوفیلیزه.
- مقدار بسته بندی: 25 میلی گرم در یک ویال.
- حلال مناسب: آب مقطر.
- حلالیت اعلام شده: حداقل 5 میلی گرم بر میلی لیتر در آب.
- طول موج اندازه گیری محصول واکنش: 405 نانومتر.
- مقدار pNA آزاد اولیه: کمتر از 0.05 درصد.
در فرمولاسیون لیوفیلیزه از مانیتول به عنوان ماده کمکی استفاده می شود. وجود این ماده باید هنگام محاسبه غلظت واقعی سوبسترا بر اساس مقدار موثر درج شده در گواهی آنالیز در نظر گرفته شود.
مکانیسم عملکرد سوبسترای کروموژنیک ترومبین
عملکرد BIOPHEN CS-01(38) بر اساس تجزیه آنزیمی یک سوبسترای پپتیدی توسط ترومبین است. در این واکنش، ترومبین پیوند حساس سوبسترا را هیدرولیز کرده و ترکیب پارا نیتروآنیلین (pNA) را آزاد می کند.
پارا نیتروآنیلین دارای رنگ زرد است و جذب نوری آن در طول موج 405 نانومتر با استفاده از اسپکتروفتومتر یا دستگاه میکروپلیت ریدر مناسب اندازه گیری می شود. میزان افزایش جذب نوری در شرایط کنترل شده آزمایش با فعالیت آنزیمی ترومبین ارتباط دارد.
هرچه فعالیت ترومبین در شرایط یکسان بیشتر باشد، سرعت آزادسازی pNA و افزایش جذب نوری بیشتر خواهد بود. بنابراین می توان از تغییرات جذب نوری برای بررسی فعالیت آنزیم یا مقایسه نمونه های آزمایشگاهی استفاده کرد.
اگرچه این محصول به عنوان سوبسترای مناسب ترومبین شناخته می شود، اما فعالیت آن کاملا منحصر به ترومبین نیست. سایر پروتئازها مانند کالیکرئین، پلاسمین و فاکتور Xa نیز ممکن است با آن واکنش نشان دهند. به همین دلیل، برای دستیابی به نتایج اختصاصی باید شرایط آزمایش و ترکیب نمونه کنترل و اعتبارسنجی شوند.
کاربردهای آزمایشگاهی و تحقیقاتی BIOPHEN CS-01(38)
سوبسترای کروموژنیک ترومبین در آزمایش هایی استفاده می شود که اندازه گیری مستقیم یا غیر مستقیم فعالیت فاکتور IIa اهمیت دارد. این ماده به ویژه در مطالعات انعقاد خون و بررسی مهارکننده های آنزیم ترومبین کاربرد دارد.
- سنجش فعالیت ترومبین: اندازه گیری فعالیت آنزیمی ترومبین در نمونه ها و محلول های تحقیقاتی.
- مطالعات هموستاز: بررسی واکنش های مرتبط با فاکتور IIa و مسیرهای انعقادی.
- آزمون های ضد ترومبین: بررسی فعالیت آنتی ترومبین و اثر مهارکننده های ترومبین در شرایط آزمایشگاهی.
- سنجش فعالیت ضد IIa هپارین: استفاده به عنوان سوبسترای رنگ زا در روش های معتبر اندازه گیری فعالیت هپارین.
- مطالعات داروهای ضد انعقاد: ارزیابی اثر ترکیبات مهارکننده مستقیم یا غیر مستقیم ترومبین.
- تحقیقات بیوشیمیایی: بررسی سینتیک آنزیمی و رفتار ترومبین در شرایط مختلف واکنش.
این محصول از نظر ساختار شیمیایی و کاربرد با سوبسترای شناخته شده Chromogenix S-2238 قابل مقایسه است. با این حال، هنگام جایگزینی این دو معرف در یک روش آزمایشگاهی باید سازگاری شرایط واکنش و عملکرد روش بررسی شود.
نحوه آماده سازی و شرایط نگهداری معرف
سوبسترای BIOPHEN CS-01(38) به صورت لیوفیلیزه عرضه می شود و برای استفاده باید با مقدار مناسبی آب مقطر بازسازی شود. حجم آب مورد نیاز به غلظت نهایی مورد نظر و پروتکل آزمایش بستگی دارد.
به عنوان نمونه، افزودن 5 میلی لیتر آب مقطر به 25 میلی گرم سوبسترا، محلولی با غلظت اسمی 5 میلی گرم بر میلی لیتر ایجاد می کند. همچنین با افزودن 20 میلی لیتر آب مقطر، غلظت اسمی محلول به 1.25 میلی گرم بر میلی لیتر می رسد.
محلول آماده شده باید مطابق شرایط روش آزمایش استفاده شود. غلظت مناسب سوبسترا، زمان انکوباسیون، دما و نوع بافر می توانند بر سرعت واکنش و نتیجه سنجش تاثیر بگذارند.
ویال باز نشده باید در دمای 2 تا 8 درجه سانتی گراد و دور از نور نگهداری شود. در صورت رعایت شرایط توصیه شده، محصول لیوفیلیزه تا تاریخ انقضای درج شده روی بسته بندی پایدار است.
طبق اطلاعات فنی سازنده، محلول بازسازی شده در دمای 18 تا 25 درجه سانتی گراد تا 7 روز و در دمای 2 تا 8 درجه سانتی گراد تا 3 ماه پایداری دارد. از انجماد محلول بازسازی شده باید خودداری شود.
برای جلوگیری از آلودگی یا کاهش کیفیت معرف، استفاده از ظروف تمیز، بستن مناسب ویال و رعایت دستورالعمل آماده سازی توصیه می شود.
نکات مهم هنگام خرید سوبسترای ترومبین کد 229001
هنگام خرید سوبسترای کروموژنیک ترومبین HYPHEN BioMed باید به کد رسمی محصول، خلوص، مقدار بسته بندی و سازگاری آن با پروتکل آزمایش توجه شود.
کد 229001 مربوط به بسته بندی 25 میلی گرمی است. همین سوبسترا با کد 229001C نیز در بسته بندی 12 ویال 25 میلی گرمی توسط سازنده عرضه می شود. این کد، بسته بندی متفاوت محصول است و نباید به عنوان کد جایگزین رسمی بسته تک ویالی ثبت شود.
برای انجام آزمون های رنگ سنجی، استفاده از دستگاه مناسب برای خوانش جذب نوری در 405 نانومتر، بافر سازگار و تجهیزات دقیق اندازه گیری حجم ضروری است.
همچنین پیش از سفارش باید گواهی آنالیز (COA)، تاریخ انقضا، شرایط حمل و نقل و خلوص سوبسترا بررسی شود. اگر هدف استفاده در آزمون ضد IIa هپارین یا سنجش مهارکننده های ترومبین است، لازم است سایر معرف های مورد نیاز نیز مطابق پروتکل آزمایش تهیه شوند.
BIOPHEN CS-01(38) یک ماده رنگ زا برای سنجش فعالیت آنزیمی است و نباید با ترومبین انسانی خالص شده، کیت کامل Anti-IIa یا رفرنس استاندارد دارویی اشتباه گرفته شود.
دیدگاه‌ها
هنوز دیدگاهی ثبت نشده. اولین نفری باشید که نظر می‌دهد.
دیدگاه خود را بنویسید
نشانی ایمیل و موبایل شما منتشر نخواهد شد.